一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：建议第一次传代比例为1:2

备注：首次传代后建议更换培养基，并用无菌离心管收集细胞培养液以作对比培养；如对比结果不佳，建议直接选购尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收货后的处理

收到细胞后，应快速培养至良好状态，并填充完全培养液封闭瓶口，以确保运输细胞的最佳状态。使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，随后放置在超净工作台内进行严格的无菌操作，将细胞瓶置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态。此后，通过显微镜观察细胞生长情况，并保存不同倍数（例如：40x、100x、200x）的照片，前三天的照片为售后依据，未提供照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞未超过80%汇合度时，将完全培养液收集于离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2孵箱中培养。如细胞密度超过80%，请遵循如下步骤进行传代：

弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，放置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞情况，若复圆并开始脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后添加5ml以上完全培养基终止消化。
轻轻吹打细胞至完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，重新加入1-2ml完全培养基重悬。
按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后置入37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

当细胞覆盖T25培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗。
添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后立即加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，转移至15ml离心管中，在1000rpm下离心5分钟。
弃上清，沉淀细胞并加入1ml 尊龙凯时无血清冻存液，混匀后转移至冻存管中。
将冻存细胞直接放入-80℃的冰箱中，如后期需转入液氮罐中，应在-80℃冰箱存放24小时以上后再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管，快速放入37℃水浴中解冻，直至冻存管中无结晶，用75%的酒精擦拭外壁。
将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，在1000rpm下离心5分钟。
弃上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放置于37℃、5% CO2培养箱中培养。
第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中容易脱落，这是正常现象。如数量减少，请将培养瓶中的培养液收集至离心管，进行离心处理，收集上清以备对比培养，随后进行消化和重悬。按照上述步骤进行传代，确保细胞的健康情况。

五、售后条款

1）细胞问题的重发情况

细胞如在运输中遇到下列问题可进行重发：

细胞运输中出现丢失、瓶身破损、严重漏液等情况。
细胞污染问题需在收到产品后48小时内提供实验结果。
常温发货的细胞静置24小时后生存率低于标准。

2）不予重发的情况

以下情况不予重发：

客户造成的污染。
不当操作导致细胞状态不佳。
非推荐的细胞培养体系造成的细胞状态不良。
收货后未及时告知情况。

如需要更多信息或帮助，请联系尊龙凯时客服团队，感谢您的信赖与支持。