最小抑菌浓度（MIC）的测定是评估抗菌剂对微生物生长抑制能力的重要实验技术。该方法主要包括微量稀释法和常量肉汤稀释法。琼脂稀释法以其操作简便、成本低廉及适用于高通量筛选等优势，特别适合自动化操作和药物浓度的精确控制。相比之下，肉汤稀释法则更加直观，操作简单，适合在实验室规模进行检测，并且可以根据实验需求灵活调整药物浓度和培养基体积。

琼脂稀释法

1. **原理**：本实验采用琼脂稀释法，将不同浓度的抗菌剂溶解于琼脂培养基中，然后点种细菌。通过观察细菌的生长情况，确定该抗菌物质抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法尤其适用于不溶性抗菌产品。

2. **操作步骤**：

1. 抗菌溶液的配制：在无菌环境下，取5ml或5g样品（固体需研磨），加入45ml灭菌磷酸缓冲液中，充分震荡以制备10%的均匀分散溶液或悬液。
2. 含抗菌剂的培养基配制：使用PBS对抗菌溶液进行系列稀释，以制备不同浓度的受试液，置于45℃至50℃的水浴中恒温备用。
3. 双倍浓度培养基配制：称取76g的MH琼脂培养基，溶解于1000ml的水中，加热至沸腾，121℃压力蒸汽灭菌15分钟，置于45℃至50℃水浴备用。
4. 含抗菌液的培养基配制：取10ml系列稀释的抗菌液加入平皿内。同时加入10ml的双倍MH琼脂培养基，轻轻摇晃混匀，待凝固后备用。
5. 接种：使用加样器取1μl至2μl的菌悬液（约107cfu/ml）点种于含抗菌液的平皿，接种后形成的菌液圈直径应为5mm至8mm（每个点菌量约104cfu）。
6. 阳性对照：以同样方式接种不含抗菌成分的MH琼脂平板作为阳性对照。
7. 培养观察：将接种后的平板置于35℃培养箱中倒置培养18至24小时，观察结果。

3. **评判标准**：当细菌生长被完全抑制时，相应的最低抗菌液浓度即为该样品对受试菌的MIC。单一菌落的生长可被忽略不计。

营养肉汤稀释法

1. **原理**：本实验将不同浓度的抗菌剂溶解于营养肉汤培养基中，接种细菌并观察其生长情况，以确定抗菌剂抑制受试菌生长的最低浓度，即最小抑菌浓度（MIC）。此方法适用于可溶性抗菌产品。

2. **操作步骤**：

1. 严格按照2112方法制备金黄色葡萄球菌及大肠杆菌悬液。
2. 含抗菌剂的培养基配制：以蒸馏水对抗菌溶液进行倍系列稀释，取每个稀释度的25ml加入到含25ml双倍浓度营养肉汤的试管中。
3. 接种：取0.1ml的菌悬液（约108cfu/ml）接种于含抗菌剂的营养肉汤试管中，作为实验组样本。
4. 阳性对照：以同样方法接种不含抗菌剂的营养肉汤试管中，作为阳性对照组样本。
5. 阴性对照：取两个不含抗菌剂的营养肉汤试管作为阴性对照组样本。
6. 培养观察：将实验组、阳性对照组及阴性对照组样本放置在37℃培养箱中培养48小时，观察结果。
7. 活菌计数：在实验过程中，应对菌悬液进行活菌计数，其作用浓度应控制在5×105cfu/ml至5×106cfu/ml之间。

3. **评判标准**：当阳性对照管内有细菌生长（混浊），而阴性对照管无菌生长（透明），在试验用菌悬液的有效浓度为5×105cfu/ml至5×106cfu/ml时，试验组无菌生长的最高稀释度对应的抗菌剂浓度即为该样品对受试菌的MIC。

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