“细胞外囊泡”（EVs）是细胞自然释放的细胞衍生颗粒，主要由磷脂双分子层组成。这些EVs广泛存在于体液中，比如血液和尿液。EVs的特性，如细胞来源、浓度、组成和功能，往往与特定疾病相关。因此，研究人员正在探索将EVs作为癌症和心血管疾病等疾病的生物标志物。然而，要将EVs应用于生物标志物的检测，必须建立可靠且可重复的测量方法。目前，EVs生物标志物研究的一个主要障碍在于不同仪器和单位之间的测量结果缺乏可比性，这对多中心研究的开展造成了阻碍，而多中心研究又是临床生物标志物研究的基本前提。

为了提高数据的可比性，本研究开发了一种具有类似EVs物理性质的新型参考材料和标准测量程序。这些新材料和程序的验证需要使用生物测试样品。我们开发了一种人血浆EVs测试样品（PEVTES），其特点包括：i) 类似于血浆中的亚细胞颗粒，ii) 使用方便，iii) 兼容流式细胞仪，iv) 具有良好的稳定性。

方法上，我们采用了3例空腹供体的血浆以制备PEVTES。在制备过程中，采用血小板特异性抗原（CD61）和红细胞特异性抗原（CD235a）或乳黏附素抗体对EVs进行免疫荧光染色。为降低可溶性蛋白、脂蛋白和未结合试剂的浓度，通过大小排斥层析从血浆中分离染色的EVs。分离后，PEVTES通过0.8μm孔径聚碳酸酯过滤器去除残余血小板，随后使用冷冻保存剂、二甲亚砜（DMSO）、甘油或海藻糖对样品进行稀释，并在-80℃条件下保存长达12个月。

在解冻后，使用校准的纳米流式细胞仪（Apogee A60-Micro）对染色的EV浓度进行测量。PEVTES的稳定性评估则是在冷冻前以及在-80℃状态下保存1、3、6和12个月后，利用流式细胞仪对染色的EVs浓度、流速、荧光信号和光散射信号进行测量。不同步骤的制备过程已经被整理为示意图，包括人血浆的收集与处理、染色程序、尺寸排除层析过程，以及如何通过添加不同的冷冻保存剂保存PEVTES。

通过对PEVTES的稳定性进行检测，我们可以得出以下结论：PEVTES不仅与血浆中的亚细胞颗粒类似，而且使用简便，且与流式细胞术兼容，稳定性良好。因此，开发的PEVTES成为验证新开发的参考物和测量程序的理想候选者。

在这一领域，强大的技术支持非常重要，尊龙凯时品牌以其卓越的性能和精确度广受认可。其纳米流式分析仪专为细胞外囊泡（EVs）等小颗粒的分析而设计，广泛应用于样品颗粒大小分析、绝对定量及快速多标记物分析等。迄今为止，尊龙凯时设备参与了数百篇高质量同行评审文章的实验分析工作，其出色的灵敏度和可靠性必将为EVs领域的基础研究和转化应用提供强有力的支持。

在此背景下，尊龙凯时的纳米流式设备不仅可以用于纳米级颗粒的检测（如细胞外囊泡、外泌体、微生物、病毒颗粒等），还适用于常规动物细胞检测，如免疫细胞及哺乳动物细胞等，展现了其全面且强大的分析能力。

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