尊龙凯时猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）使用说明书

产品概述

【产品名称】通用名称：猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）
英文名称：Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
【包装规格】50T/盒

预期用途

本试剂盒通过实时荧光PCR的原理，能够定性检测猪蓝耳病病毒，对病毒的诊断及疗效评估具有重要的指导作用。

原理

本试剂盒针对猪蓝耳病病毒的高度保守区域设计了特异性引物和探针。在含有猪蓝耳病病毒基因组模板的反应体系中，PCR反应会进行并释放荧光信号。通过荧光定量PCR仪实时监测和输出PCR过程中相应通道信号，从而实现检测结果的定性分析。

试剂盒组成

序号 组成 50T/盒
1. PRRSV RT-PCR反应液 875 μL × 1管
2. PRRSV混合酶液 125 μL × 1管
3. PRRSV阳性对照 40 μL × 1管
4. PRRSV阴性对照 40 μL × 1管
5. 说明书 1份
注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含猪蓝耳靶基因的质粒。

储存条件及有效期

避光保存于-20℃以下，避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器

本试剂盒适用于多个品牌的多通道实时荧光定量PCR仪，包括ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler等。

样本要求

1. 血液或血清样品：使用无菌注射液抽取样品，置于离心管中待检。
2. 肺脏、淋巴结和脾脏样品：取样本20g，加少量灭菌PBS，用无菌研磨器研磨至糊状，再用4倍PBS稀释，8000rpm 4℃离心10min，取上清待检。
3. 避免标本间交叉污染。
4. 样本收集后可立即检测；若不能立即检测，可置于2～8℃冷藏。若需长期保存，样本应冻存于-80℃以下，避免反复冻融。

检验方法

1. **试剂准备**（试剂准备区）
(1) 从冰箱中取出试剂盒，并取出实验所需试剂，充分融化混匀并瞬时离心。
(2) 计算所需的反应数（n），并根据反应体系计算试剂量。
(3) 在无菌离心管中加入上述试剂，充分混匀后瞬时离心，并按照20μL/管分装至PCR反应管。
2. **样本准备**（样本处理区）
使用QIAGEN、Roche公司的RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作请遵循其说明书。
3. **加样**
在以上制备好的PCR反应管中分别加入处理好的待测样本RNA各5μL，终体积为25μL/管。
阴性对照和阳性对照管则分别加入5μL对应的对照品，终体积同样为25μL/管。
4. **PCR扩增**
(1) 取样本处理区准备好的PCR反应管，放置在实时荧光定量PCR仪样品槽中并记录顺序。
(2) 设置核酸扩增相关参数进行PCR扩增。

检测结果的解释

标本检测结果可以通过FAM通道解读：如果标本中检出猪蓝耳病病毒则为阳性，未检出则为阴性。

注意事项

1. 实验室需严格遵守基因扩增检测相关管理规范。
2. 样本处理过程应在0-4℃条件下进行，并立即检测。
3. 避免交叉使用实验器具以防污染。
4. 使用时确保反应管密闭，防止液体蒸发。
5. 所有试剂在使用前应充分融化并瞬时离心。
6. 试剂盒的阴性和阳性对照应单独存放。
7. 为避免荧光干扰，避免直手接触PCR管。
8. 检测结束后立即消毒工作台，定期清洁实验用品。
9. 仪器参数设置需遵循说明书要求，避免不同批号试剂混用。

选用尊龙凯时的猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒，确保准确、可靠的实验结果，为猪健康保驾护航！